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細胞凍存液氮罐的具體操作步驟和細胞復蘇流程

發布時間:2019-06-14瀏覽:1049次

    大量細胞如何儲存在液氮罐里,液氮罐里一般灌有低溫液氮,細胞的儲存需要低溫環境,放入-196度的液氮里對細胞是長期保存的一個適合的環境。細胞凍存液氮罐是將細胞存入液氮罐的液相里儲存,有專用的方形抽屜式提籃,2ml凍存管放入凍存盒然后再放入提籃后浸入液氮里,完全浸入。使細胞完全處于液氮-196度環境下,才能夠長期保存細胞。  
細胞凍存液氮罐的具體操作步驟:  
    1、培養皿或培養瓶中細胞按常規方法消化,或分離獲得原代細胞后,收集于離心管中。  
    2、使用離心機離心,去除上清,收集細胞沉淀。  
    3、根據細胞生長密度加入適量的LiveCyteTM細胞凍存液進行重懸,充分混勻。  
    4、將細胞懸液分裝至凍存管中,直接放置于-80°C冰箱保存。24小時后可移入液氮長期保存(可選)。  
細胞凍存液氮罐的細胞復蘇流程:  
    1、從-80°C冰箱或液氮罐中取出細胞。  
    2、迅速放入37°C水浴,并不時搖動,在3分鐘之內使其完全融化。  
    3、在凍存管中加入少量完全培養基,再將細胞混合液移入含有該細胞完全培養基的離心管中,樣品和培養基比例為1:10,然后輕輕吹打,混合均勻。  
    4、離心后去除上清,收集細胞沉淀。  
    5、輕輕彈松細胞沉淀,加入適量培養液后接種于培養瓶或培養皿中,輕輕晃動使細胞分布均勻,置于37℃孵箱中培養。  

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